冠瘿病菌检疫技术操作办法
日期:2007年07月12  新闻阅读次数:

分 布 北京、河北、山西、内蒙古、辽宁、吉林、上海、浙江、福建、山东、河南、重庆、四川、陕西、甘肃、宁夏等省(市、区)及湖北省十堰市(郧西县)、神农架林区。
寄主植物 冠瘿病菌主要危害苹果属、梨属、山楂属、李属、蔷薇属、丁香属、柑橘属、柿树属、山茶属、杨属、柳属、核桃属、板栗属等植物。
危害及症状 冠瘿病又称根癌病,通过携带Ti 质粒的菌株侵染植物的根茎部引起过度增生而形成瘿瘤。该病菌为土壤习居菌,寄主范围广泛。受害苗木或树木生长衰弱,如果根茎或主干上的病瘤环干一周,则生长趋于停滞,叶片发黄而早落,甚至死亡。
该病主要发生在幼苗和幼树干基部和根部。初期在被害处形成灰白色瘤状物,从初期表面光滑、质地柔软的小瘤逐渐增大成不规则状,表面由灰白色变成褐色的大瘤。在大瘤表面粗糙并龟裂,质地坚硬,内部木质化,并在瘤的周围或表面产生一些细根。瘤的内部组织紊乱,混有薄壁组织及维管束。瘤的直径最大可达30cm。
传播途径 病菌栖息于土壤及病瘤的表层,可通过雨水、地下害虫等自然传播,主要是通过带病苗木、插条、接穗或幼树等人为调运进行远距离传播。
防治措施 
检疫措施 加强检疫,发现带疫苗木应及时销毁。
药剂防治 在寄主植物生长期间,对初发病的带疫植株,可采取切除病瘤,并用石硫合剂或波尔多液涂抹伤口。
1. 产地检疫
1.1 踏查
 在种苗繁育基地、林地、果园和木本花卉栽植地,调查植株是否表现矮化、干枯,叶片是否黄化、早落,根系是否细小、须根少等症状。
调查中幼龄植株的根冠部是否有灰白色、球形的光滑软质瘤,是否有褐色、表面粗糙龟裂的木瘤;根茎和主干上是否有表面粗糙、龟裂、质地坚硬的木瘤。
1.2 标准地调查
 按林分面积设置,10hm2以下(含10hm2)设1块,10hm2以上按调查总面积的2%设置。每块标准地面积为0.1hm2,在标准地内随机抽取20~30株进行调查。
1.3 病害分级标准
轻 被害株率5%以下;
中 被害株率6%~15%;
重 被害株率16%以上。
2. 调运检疫
2.1 抽样
苗木按一批货物总件数(株)的5%~10%抽取,少于5件或50株的应全部进行调查。采取分层方式设5个样点进行抽样。将抽取的样品放在100cm × 100cm 的白布(或塑料布)上,逐株进行检查。
2.2 现场检查
检查寄主植物的根冠部是否有瘤状突起,是否有带细根的木瘤,是否有大小不一、形状不同或互相连结的瘤。
检查寄主植物的根茎和主干上是否有表面粗糙、龟裂、质地坚硬的木瘤。
3. 检疫检验
3.1 分离培养检验
 供检样品的制作
取新鲜幼嫩根瘤,用解剖刀切成约 2mm × 2mm 的小块,置于灭菌培养皿内,放入灭菌水清洗并去除陈腐组织和杂质。将洗净的材料放在70%酒精里蘸5s ,在酒精灯火焰中来回3次后,放入灭菌水里清洗3次。将处理的材料放入研钵内,加入适量灭菌水研碎后静置 10min 。
 检验方法
用接种环蘸取上述分离材料的组织液,接种在YEM培养基上划线分离。检查培养基上是否形成有光泽、隆起、边缘完整、半透明、呈灰白色至淡灰棕色的黏稠圆形菌落。
3.2 染色检验
革兰氏染色 采用结晶紫草酸胺染色法。经固定涂片 → 染色1min→ 水洗数秒吸干 → 碘液处理1min→ 水洗数秒吸干 → 褪色 30s → 水洗数秒吸干 → 复染 10s → 水洗吸干后镜检。
土壤杆菌属为革兰氏阴性,呈红色。
鞭毛染色 经染媒剂 5~7min 处理 → 水洗干燥 → 苯酚品红染色5min → 水洗干燥后镜检。
土壤杆菌属镜检菌体和鞭毛为阴性反应,呈红色,鞭毛1~6根。
 病原鉴定
冠瘿病菌为根癌土壤杆菌,属革兰氏阴性菌,有荚膜,不形成芽孢,细菌杆状, 14根周生鞭毛,如1根则多侧生。菌落通常为圆形,隆起、光滑、白色至灰白色、半透明。
4. 除害处理
销毁处理 发现带疫植株应作销毁处理。
药剂处理 怀疑带疫的苗木应采用1%硫酸铜浸5min,对不带疫的苗木用500~1 000mg/ml链霉素液处理后集中隔离试种,定期检查。
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